Introduccion
COMENTARIO
Real-time PCR detection and frequency of 16S rDNA mutations associated with resistance and reduced susceptibility to tetracycline in Helicobacter pylori from England and Wales. Lawson AJ et al.J Antimicrob Chemother 2005; 56: 282-286.
La resistencia a tetraciclina en H. pylori se produce por la presencia de mutaciones en el ADNr 16S que se corresponde con la región de la hélice 31 de la molécula del ARNr, en el área que contiene el punto de unión de la tetraciclina al ribosoma bacteriano. Se ha descrito que la presencia de una mutación triple AGA926-928TTC confiere alto nivel de resistencia (CMI >= 256mg/l) mientras que una o dos mutaciones en esas mismas bases confieren resistencia de bajo nivel.
Los autores de este trabajo se plantean investigar la presencia de las mutaciones asociadas con resistencia o con sensibilidad disminuida a tetraciclina en cepas de H. pylori aislados en Inglaterra o Gales y desarrollar un ensayo de PCR en Tiempo Real para detectar estas mutaciones. Estudian la sensibilidad a tetraciclina mediante difusión con disco y cuando observan una sensibilidad disminuida (halo de inhibición de menos de 30 mm con un disco de 2mcg de tetraciclina) lo confirman por E-test y dilución en agar. Se seleccionaron 18 cepas con sensibilidad disminuida a tetraciclina de un total de 1006 cepas estudiadas. 3 de las 18 presentaban resistencia a tetraciclina (CMI 16 a 64mg/L). En 10 de las 18 cepas se detectaron mutaciones mediante secuenciación: en 7 cepas la mutación A926G (CMI de 2 a 16mg/L por dilución en agar), en una la mutación A926C (CMI de 8mg/L por dilución en agar), en una la mutación A928C (CMI de 4mg/L por dilución en agar) y en una la mutación doble A926T/A928C (CMI de 64mg/L por dilución en agar). En las 8 cepas restantes en las que no se detectó mutación, la CMI fue de 2 a 4mg/L mediante dilución en agar. El ensayo de PCR en Tiempo Real identificó las mutaciones en las 10 cepas detectadas por secuenciación y no las detectó en ninguna de las 100 cepas sensibles que estudiaron. También fue capaz de detectar sensibilidad a tetraciclina en 20 muestras de biopsia gástrica.
Aunque la resistencia a teracicilina es poco frecuente, en este estudio detectan resistencia en 3 cepas y sensibilidad disminuida en otras 15. En 10 de las 18 cepas con sensibilidad disminuida se detectaron mutaciones en el gen ADNr 16S y se pudieron identificar mediante una técnica de PCR en Tiempo Real.